做RT-PCR时,上下引物退火温度一定要一样吗?内参条带很亮,为什么没有目的基因?

来源：学生作业帮编辑：搜搜做题作业网作业帮分类：生物作业时间：2024/07/04 13:52:44

上下引物的 Tm最好相似,不能差异太大,不然不好设计退火温度；
内参条带很亮,说明RT应该没多大问题,问题可能出现在PCR上.
没有目的基因是因为
1 该基因确实不表达；
2 你的引物不特意,到NCBI的PrimerBlast 看看；

做RT-PCR时,上下引物退火温度一定要一样吗?内参条带很亮,为什么没有目的基因? 我做的RT-PCR怎么样让内参一致?刚入门老板让做内参的条件反复做也没有要P出来的目的条带我的退火温度是55 可以 RT PCR只跑出内参的条带,没有目的基因,原因有哪些? PCR只有引物二聚体的条带,没有目的基因条带引物分哪几种?扩基因所用的引物和做RT-PCR的引物一样吗? 为什么我的RT-PCR内参跑不出来.目的条带到是跑出来了为什么做PCR设定引物退火温度时设定的退火温度要比合成引物得到的引物Tm值低几度? RNA反转录后,分别用内参引物和目的基因引物扩增,目标基因有条带,内参没有扩出来,问题可能处在什么地方用RT-PCR检测目的基因的表达情况,需将内参基因的条带亮度调成一致. 用RT-PCR检测目的基因表达差异,需将内参基因的电泳条带亮度调成一致. 半定量rt pcr内参和目的基因的引物加的量相同吗,能否放在同一管中跑PCR 请问跑琼脂糖凝胶电泳时内参β-actin条带的亮度一定比目的基因条带亮吗?