搜搜做题作业网做鼠细胞培养实验的具体步骤
来源：学生作业帮 编辑：搜搜做题作业网作业帮 分类：生物作业 时间：2024/07/17 14:56:06
做鼠细胞培养实验的具体步骤
最好是鼠肝细胞或者肺细胞.越详细越好...
最好是鼠肝细胞或者肺细胞.越详细越好...
原代细胞培养吗?
你看看这个：
1.组织修剪、漂洗：修剪去除血管等杂组织,D—Hanks液中漂洗数次,以除去血块等.
2.剪切：将心室肌用锋利的眼科剪反复剪切组织至剪成1～2mm3小块,在剪切过程中,可以适当向组织中滴加1～2滴培养液,以保持湿润.
3.消化：将组织小块转移至100ml的玻璃瓶中,再加入30～50倍组织量并预温37℃的0.08%胰酶消化液,37℃摇床消化6min左右.
4.细胞分离：消化完毕,用吸管轻轻吸吹几下,使组织小块散开,静置2min后,吸取上面的混悬液（弃去第1次的混悬液）,经140目尼龙网膜过滤至盛有终止液试管中,1000rpm,离心10分钟,弃去上清,加适量的培养液悬混.在装有组织小块的玻璃瓶中再加入30～50倍组织量并预温37℃的0.08%胰酶消化液,重复第4、5步骤,直至大部分组织小块消失.
5.细胞计数：将上述获得的细胞悬液,吸出少许,适当稀释,加台盼蓝溶液染色,用红血球计数板计数活细胞和死细胞,计算细胞密度和存活率.
6.细胞接种：将细胞接种至30ml的培养瓶中,每瓶6×105,用含15%小牛血清的DMEM培养液培养.
7.培养：5%CO2、37℃培养箱培养12h,显微镜下可见细胞贴壁,呈多角形,培养24h,镜下见细胞已连结在一起,部分细胞开始搏动.
8.换液：培养3～5d,细胞换液.
再问： 这是做的什么细胞？能写上传代培养吗？如果我们做实验做到传代还需要做下去吗？例如后面的冻存复苏。。。。。。。谢谢！
你看看这个：
1.组织修剪、漂洗：修剪去除血管等杂组织,D—Hanks液中漂洗数次,以除去血块等.
2.剪切：将心室肌用锋利的眼科剪反复剪切组织至剪成1～2mm3小块,在剪切过程中,可以适当向组织中滴加1～2滴培养液,以保持湿润.
3.消化：将组织小块转移至100ml的玻璃瓶中,再加入30～50倍组织量并预温37℃的0.08%胰酶消化液,37℃摇床消化6min左右.
4.细胞分离：消化完毕,用吸管轻轻吸吹几下,使组织小块散开,静置2min后,吸取上面的混悬液（弃去第1次的混悬液）,经140目尼龙网膜过滤至盛有终止液试管中,1000rpm,离心10分钟,弃去上清,加适量的培养液悬混.在装有组织小块的玻璃瓶中再加入30～50倍组织量并预温37℃的0.08%胰酶消化液,重复第4、5步骤,直至大部分组织小块消失.
5.细胞计数：将上述获得的细胞悬液,吸出少许,适当稀释,加台盼蓝溶液染色,用红血球计数板计数活细胞和死细胞,计算细胞密度和存活率.
6.细胞接种：将细胞接种至30ml的培养瓶中,每瓶6×105,用含15%小牛血清的DMEM培养液培养.
7.培养：5%CO2、37℃培养箱培养12h,显微镜下可见细胞贴壁,呈多角形,培养24h,镜下见细胞已连结在一起,部分细胞开始搏动.
8.换液：培养3～5d,细胞换液.
再问： 这是做的什么细胞？能写上传代培养吗？如果我们做实验做到传代还需要做下去吗？例如后面的冻存复苏。。。。。。。谢谢！