简并引物经PCR的产物是不是都需要经过克隆?

来源：学生作业帮编辑：搜搜做题作业网作业帮分类：生物作业时间：2024/08/09 11:03:08

简并引物经PCR的产物是不是都需要经过克隆?
我设计的是一对简并引物,测序后有4个位点出现重叠峰,是不是简并引物的PCR产物都会出现此现象?克隆后就能确定这4个重叠峰的碱基吗?
我现在已经做过TA克隆了,应该送去几个菌液测序?测序结果是不是会出现4个大小一致的基因片段?这4个基因片段我都需要用上吗?

如果你用你的PCR产物去测序的话是这样的.因为你拿到的简并引物实际上是几种引物的混合物,因此测序时候会在你兼并引物的地方产生重叠峰.
如果你是挑了单菌落,再提取质粒去测序发现由重叠峰的话,说明你挑的菌有几个不同的质粒的转入.因为如果只有一个质粒转入的话,你在这个单菌落提取的质粒中的序列是唯一的.
克隆以后送两三个去测序就可以了,然后挑测序验证正确的那个序列去做下游操作就行了.

PCR产物测序问题.我用简并引物扩增未知基因.设计了几对引物.都出现了目的条带.发现其中两对引物的产物长度比较长.因为我关于PCR克隆基因的引物问题普通PCR和基因克隆PCR的引物设计有什么不同和注意事项? pcr引物的作用 PCR引物设计中,引物上是否需要每个碱基都与模板链结合? PCR技术的解释引物是不是必须人工导入同一模版DNA在进行PCR扩增时是不是需要不同的两种引物?为什么资料上说引物只要Tm值相似就行? 在参考资料上看到PCR技术需要引物,DNA复制也需要引物,DNA复制的引物是什么呢? 利用PCR技术复制那么多DNA一共需要多少引物?每复制一次都需要一段引物吗? 用primer 5.0 设计引物的时候,哪个才是真正的PCR产物退火温度 pcr中两条引物在两条链上吗?如果是,怎么控制产物的长度,谢谢! 在PCR产物基础上如何设计RACE引物,其原理是怎样的?