要扩增3000左右的目的片段,但是设计的上下游引物的GC含量差异很大,如何是好?急求……

来源：学生作业帮编辑：搜搜做题作业网作业帮分类：生物作业时间：2024/07/11 19:24:58

要扩增3000左右的目的片段,但是设计的上下游引物的GC含量差异很大,如何是好?急求……
即起始密码子之后和终止密码子之前的部分,GC差异很大……

是想扩增CDS序列做基因的过表达么?可以在前后多带一些UTR进去只要把整个CDS包含在里面就可以过表达该基因了这样引物的选择就大了很多
再问： UTR带过多了，对基因的表达会不会有影响？对实验的结果不会有影响吗？我看国内的许多文献，都是从ATG开始，到终止密码子结束，是不是比非如此……
再答：不会有影响人家基因本身不就是带着UTR的么只是你取的越长PCR的时候越容易发生错配突变啥的像你这3000就已经很难保证准确性了必须要用高保真的酶实在不行可能还得分段P再连起来

已知一个基因的mRNA和cDNA,我想克隆此基因,进行转染表达,但是设计的引物无法扩增出目的片段……急求! PCR 引物设计,在扩增一个基因片段,1200bp左右,编码区1000个bp左右.由于上游引物GC含量高,我想分两段扩增追问引物设计第一次PCR的产物胶回收后用纯化吗,还是可以直接当做底物?目的基因3‘端GC含量太高,导致上下游引物Tm值差高分~~急求!如果要用PCR扩增下列序列,请写出上游引物和下游引物的序列 PCR引物设计问题如果我设计的引物,扩增出来的目的片段长度为200BP,但是石蜡包埋组织提取出来的DNA模板大多数在10 为什么PCR引物设计中引物可以不从扩增序列两头开始?不从两头开始能得到上下游引物以外的序列吗? 谁能通俗易懂的给我解释一下PCR反应过程中,引物与模板如何结合?扩增出来的是上下游引物之间的片段呢? 关于引物和目的基因的关系.针对某基因设计的同一对引物在不同人的基因组中扩增的片段一定一样吗同样的模板,只是引物不同扩增基因组上不同的片段,为什么条带亮度差别很大 pcr时如何进行上下游的引物设计? 我想问根据同一个基因设计的两个引物,都在小麦中扩增,扩增片段大小是否一样? PCR扩增基因设计引物时,用Primer5检测上游引物和下游引物的互补性,显示free energy= 1.50 Kca