如何寻找与一已知蛋白质相互作用的蛋白质?如何进一步验证蛋白质之间是否确实存在相互作用(细胞内/细胞外?直接作用还是间接作
来源:学生作业帮 编辑:搜搜做题作业网作业帮 分类:语文作业 时间:2024/07/31 22:33:17
如何寻找与一已知蛋白质相互作用的蛋白质?如何进一步验证蛋白质之间是否确实存在相互作用(细胞内/细胞外?直接作用还是间接作用)?
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首先你得知道到哪里去找那个未知的蛋白(比如是哪个生物,哪种细胞内);
然后可以做CoIP(中文可能是什么共沉淀),用针对那个已知蛋白的抗体去从细胞裂解液中抓出未知的蛋白;或者,把已知蛋白联到beads上,也可以抓出未知蛋白,这叫pull-down assay;
至于验证蛋白间的作用么,细胞内(in vivo)可以用FRET,或in situ PLA;细胞外(in vitro)么还是用pull-down,要用一定浓度的盐去洗,要不然可能是非特异性结合的.
你指的间接作用是指有别的蛋白做中间人?那就看你抓出来多少东西了~
然后可以做CoIP(中文可能是什么共沉淀),用针对那个已知蛋白的抗体去从细胞裂解液中抓出未知的蛋白;或者,把已知蛋白联到beads上,也可以抓出未知蛋白,这叫pull-down assay;
至于验证蛋白间的作用么,细胞内(in vivo)可以用FRET,或in situ PLA;细胞外(in vitro)么还是用pull-down,要用一定浓度的盐去洗,要不然可能是非特异性结合的.
你指的间接作用是指有别的蛋白做中间人?那就看你抓出来多少东西了~