PCR问题-野生型条带条带出不来怎么办啊
来源:学生作业帮 编辑:搜搜做题作业网作业帮 分类:生物作业 时间:2024/07/15 09:19:42
PCR问题-野生型条带条带出不来怎么办啊
我是用拟南芥幼嫩叶片直接抽提DNA作为模板检测突变体背景的,第一次PCR后跑电泳时特异性条带和野生型条带都很清楚也很亮,但从第二次开始野生型条带就时有时无的,特异性条带一直都有.我是用的三条引物一起P的,两两配对.引物没问题,Taq酶是自制的,退火温度是58度,请问这是怎么回事啊?
我是用拟南芥幼嫩叶片直接抽提DNA作为模板检测突变体背景的,第一次PCR后跑电泳时特异性条带和野生型条带都很清楚也很亮,但从第二次开始野生型条带就时有时无的,特异性条带一直都有.我是用的三条引物一起P的,两两配对.引物没问题,Taq酶是自制的,退火温度是58度,请问这是怎么回事啊?
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首先,你从第二次实验开始结果不同,你是否确定第一次和后面的实验条件全部一样?试剂全部出自同一个试管/批次?
你把三条引物全部加在同一个试管中了么?如果是这样两种条带的产物可能对共用的引物产生竞争,比如,有可能其中一对引物与特异性的序列结合度比较高.而且你说了一个退火温度,有没有计算过这个温度是否对三条引物都适合,是不是比较接近其中一对引物的理想温度而造成这种条带差异.你可以先分开p一下看看.
你把三条引物全部加在同一个试管中了么?如果是这样两种条带的产物可能对共用的引物产生竞争,比如,有可能其中一对引物与特异性的序列结合度比较高.而且你说了一个退火温度,有没有计算过这个温度是否对三条引物都适合,是不是比较接近其中一对引物的理想温度而造成这种条带差异.你可以先分开p一下看看.