PCR产物跑胶什么条带都没有是怎么回事

来源：学生作业帮编辑：搜搜做题作业网作业帮分类：生物作业时间：2024/07/25 09:36:50

PCR产物跑胶什么条带都没有是怎么回事
DNA OD值为1.88，浓度3.4ug/uL ；跑胶检测条带清楚

做PCR时,最抑闷的一件事就是花了三个多小时,一点儿结果都没有.以前做的时候,我也遇到这增的问题!所有的反应液和底物加好了,机器设好了,跑吧,跑完PCR了,好的,再来跑电泳检测,结果,白花花一大片,什么都没有,那一刻,觉得自己好失败,别人的什么有,自己的什么都见不到,真想把机器给砸了.
    后来不断的调整Taq酶的浓度,当然是增加了,有了一点儿效果,但是,还是不理想,再调整（降低）底物（DNA）的浓度,还是不行,再调整（稀释到50倍）,再做一次,有了,很是漂亮而又清晰的PCR产物的条带! 那一刻,真是太高兴了!紧接着,又做了一次,所有的样品都有PCR产物了.
    总结一下,就是DNA的问题,它的浓度太高,而且在提取DNA时如果不纯,那么里的杂质就会太多,只有通过稀释DNA（同时也是稀释杂质）,才能使DNA在样品里的浓度和杂质浓度的比值无限大,在这样的条件下,只要有足够的酶,那么,反应就能正常进行,得到预期的产物.因为,如果杂交的浓度过大,酶的活性就会受到抑制.
    因此,我的建议是：第一,稀释底物浓度,分两个梯度（25倍,50倍）；
                      第二,加大酶的浓度（1.5或2U）.
                      以上是在25uL反应体系下的建议

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