T载体连接问题现在在做5,RACE.扩增出目的条带后胶回收,然后用特异性引物去嵌套验证,结果也有目的大小的条带扩增出来,
来源:学生作业帮 编辑:搜搜做题作业网作业帮 分类:生物作业 时间:2024/08/09 08:28:42
T载体连接问题
现在在做5,RACE.扩增出目的条带后胶回收,然后用特异性引物去嵌套验证,结果也有目的大小的条带扩增出来,这应该可以说明胶回收的目的片段是正确的.但是用T载体连接后转化到大肠杆菌中挑斑验证时用同样的嵌套引物去验证却没有扩增出条带,请问这是为什么啊?
现在在做5,RACE.扩增出目的条带后胶回收,然后用特异性引物去嵌套验证,结果也有目的大小的条带扩增出来,这应该可以说明胶回收的目的片段是正确的.但是用T载体连接后转化到大肠杆菌中挑斑验证时用同样的嵌套引物去验证却没有扩增出条带,请问这是为什么啊?
分析原因可能有:
1、T载体连接有问题,重新调整目的片段和T载体的比例,重新连接.
2、PCR某种试剂出问题了,以前有个师姐就是这样,怎么也扩不出来,让别人带样扩出来了,原来是Taq 酶出问题了,你也可以确定一下.
1、T载体连接有问题,重新调整目的片段和T载体的比例,重新连接.
2、PCR某种试剂出问题了,以前有个师姐就是这样,怎么也扩不出来,让别人带样扩出来了,原来是Taq 酶出问题了,你也可以确定一下.
RNA反转录后,分别用内参引物和目的基因引物扩增,目标基因有条带,内参没有扩出来,问题可能处在什么地方
我构建的穿梭载体,连接好后进行双酶切和PCR两个途径的检测,结果酶切没有条带显示,而PCR确有目的条带!
PCR产物测序问题.我用简并引物扩增未知基因.设计了几对引物.都出现了目的条带.发现其中两对引物的产物长度比较长.因为我
PCR中,PCV2的引物扩增后,跑电泳的条带在多少bp?
我做的是分子鉴定真菌,用的是通用引物ITS1和ITS4,pcr扩增后只有marker有条带,其他的都没有是什么原因.
PCR扩增不出来条带的原因?
转基因植物PCR检测,扩增条带比预期目的条带要大,对PCR扩增产物测序,结果与原序列比对同源性为60%,说明
组织提取的cDNA和细胞提取的cDNA用同一引物PCR扩增出来的条带长度不一样,是什么原因?有什么方法改进吗
连接到T载体上面后,做双酶切,条带不正确,目的片段变大是什么原因
是否目的基因在PCR扩增时不用在引物中加入酶切位点,就可与pGEM-T载体连接?为什么?
我用十一种微卫星引物扩增某一个体的基因组DNA,可是1.0%琼脂糖电泳检测时有的没条带,有的有很多条带?谢
PCR只有引物二聚体的条带,没有目的基因条带