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转化pET32a一个菌落也不长是什么原因啊

来源:学生作业帮 编辑:搜搜做题作业网作业帮 分类:生物作业 时间:2024/07/31 02:43:40
转化pET32a一个菌落也不长是什么原因啊
我在做分子克隆,克隆了四个片段,要在pET32a载体上表达,可是酶切,连接,转化大肠杆菌BL21以后一个菌落也不长,我已经试过各种载体和目的片段的比例,而且我没有没酶切的pET32a载体转化的效果很好,连接酶也没有问题,还有可能是什么原因呢?
PCR 扩增的目的片段,还有没切之后的纯化都是用的胶回收的办法纯化的,纯化后我也鉴定过,DNA的量都很大.切胶时用的刀片也没有生锈.
转化pET32a一个菌落也不长是什么原因啊
你每一步都要做阳性对照啊,否则你说没有问题怎么可信呢,说不定是你操作的问题呢,酶切时候的阳性对照做了没有,连接的阳性对照做了没有,还有你片段多大,是否毒性蛋白,都有影响的.