cDNA扩增体系会扩增基因组DNA中的目的基因吗

如果是用在原核上,没有多大的却别,但是如果用在真核上,cDNA扩增出来的产物就比DNA直接扩增出来的短.因为cDNA是RNA逆转录过来的,而DNA里面除了RNA上面相对的片段还有内含子的片段,在扩增的

1.首先这应该是个融合表达载体.应该考虑后面的读码框问题.就是应该适当在后面的酶切位点前加入0-2个碱基.使得你的目的基因和egfp在同一读码框内.2.KOZAK序列在真核细胞中表达有作用,这就看你后

理论应该用CDNA进行因为设计,但要保证你提取的mRNA的质量,尽量减少降解.可以在原序列基础上先写出互补序列再进行引物设计.

这个很正常,引物本身的结构和模板的结合牢固程度,就会影响扩增的效率,导致扩增出来的片段亮度不同.

换一对引物试试再问：换了三对了，就是没有目标带再答：模板量少点不知道有没有用酶切来提高基因组PCR成功率这种做法哈如果你是在别的地方看到这方法可行就试试吧

cDNA和mRNA的序列是互补的,如果用两个引物,最后的两条DNA序列分别对应于mRNA和cDNA中的一段.由于引物方向从5‘至3’,所以两个引物对应于mRNA和cDNA中相应序列即可.

反转录失败或者RNA质量不好再问：有没有可能是引物的设计不好？（引物二聚体的范围是在100bp左右）如果是cDNA反转录不好，该如何检测呢？谢谢再答：有可能是引物的问题；在P目的基因的时候，建议你同时

这个你应该看仪器说明书啊,而且一般送货上门后有人会指导的啊.

解题思路：PCR依据DNA复制的原理，要求熟悉DNA复制的过程及其特点。解题过程：解析：以模板DNA的两条链合成的子代DNA，只含有引物I或者引物II，其他的DNA同时含有引物I和引物II，所以含有引

可以的.我们验证转化结果时就是根据这个原理的,只不过一般是扩增质粒内的基因,但如果有正确的引物,同样可以扩增基因组上的基因的关于单菌落的处理,一般是把菌落挑到无菌水里,然后沸水煮5min就可以了,目的

一样的,没有任何区别.再问：谢谢您，还想再问您一个问题，用甘油保种放在-20度菌液被冻住了，会影响菌的活性吗，以前保的都没有冻住，这次是什么原因呢，也换过新的甘油了再答：冻住以后菌就很难活了。冻存液没

是的,就是你所想的一样.

非特异性条带的出现,其原因：一是引物与靶序列不完全互补、或引物聚合形成二聚体.二是Mg2+离子浓度过高、退火温度过低,及PCR循环次数过多有关.其次是酶的质和量,往往一些来源的酶易出现非特异条带而另一

这要具体分析.一种可能是你的PCR产物是非特异性片段,所以长度不一,这可以通过和你预期PCR产物的长度进行比较来判断.另一种可能是该基因在不同情况下有不同的剪接模式（alternativesplici

区分你的模板里面是否有基因组污染的方法：在做逆转录反应的同时,做一个阴性对照,其他所有都和实验组相同,除了不加入逆转录酶.得到RT-PCR产物后跑胶,如果该阴性对照里也扩增出来明显条带的话,你的模板就

典型程序：94℃,5min;(94℃,30s；55℃,30s；72℃,1min)x30；72℃,5min.典型体系：10Xbuffer（含Mg2+）,5ul；2.5mMdNTP,2ul；10uMpri

PCR(聚合酶链式反应）是利用DNA在体外摄氏95度时解旋,55度时引物与单链按碱基互补配对的原则结合,再调温度至72度左右DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链.由PCR技术制造

Pfu是DNA扩增过程中,保真性最高,出错率最低的高温DNA聚合酶.基因片段用Pfu扩增得到的产物为平末端,直接克隆比较困难.DNAPCR扩增：用Pfu进行高保真PCR扩增,50ul反应体积,一般扩增

可分为长产物片段和短产物片段两部分.短产物片段的长度严格地限定在两个引物链5'端之间,是需要扩增的特定片段.短产物片段和长产物片段是由于引物所结合的模板不一样而形成的,以一个原始模板为例,在第一个反应

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