感受态细胞保存时甘油和dmso的作用

1.你到底是感受态没制备好呢?还是转化了,但平板上没克隆呢?2.你转一个有人转成功过的试试,排除感受态和你自己操作是不是有问题?3.你用的是哪种菌啊?LBA4404?GV3101?3抗有没有+错啊?4

若感受态细胞要保存备用,液氮保存最好,其次一70℃,添加20％甘油利于冷冻保存,但添加保护剂对转化率有抑制作用.

孙小刀3个月前觉得大肠杆菌感受态细胞的制备实验简单一般实验室喜欢一下制备大量感受态储备.所以工作量比较大,制作过程到处都有,大多数人也是用化学法做.注意无菌,低温等试验环境,最主要是耐心.

这个不行的,细胞在经药物处理后,再加入MTT,就与细胞发生了反应,一般来说,加入MTT后,要在尽量短的时间内测定出结果才可以的,不然结果就不准确了,曾做过实验对比,放置几天后再测定光吸收值,与首次测定

最好在10小时内去除,不同细胞对DMSO敏感程度不同,可以复苏后立刻离心去除二甲基亚砜

一般保存是在-80摄氏度,-20度可以放一段时间,但不能太长.底部有沉淀正常,甘油只是悬浮菌体,而不能溶解,久了就会沉淀下来!转化质粒失败是其他原因,最大可能性是感受态无活性,建议重做感受态,及做即用

博凌科为生物科技-为你1、欲冷冻保存之细胞应在生长良好(logphase)且存活率高之状态,约为8090％致密度.2、冷冻前检测细胞是否仍保有其特有性质,例如hybridoma应在冷冻保存前一至二日测

问题不大,再用预冷CaCl2悬浮即可.

甘油就可以了,DMSO是用来保护细胞这种比较娇嫩的,大肠杆菌就用便宜一点的好了.有问题一起讨论解决哦~

要的,虽然没有已知的物种会在纯的DMSO里面生长,但是如果没有经过灭菌处理,难保没有孢子什么的可以把纯DMSO高压灭菌,或者在配置好冻存液以后用0.22微米的膜过滤如果想要直接过滤纯DMSO,要用ny

完全可以,我们以前就是放液氮里的～

1.将冻存的菌种1：100接种于3ml的LB液体培养基中,37℃摇床过夜震荡培养.2.取1ml活化菌种接种于100mlLB培养基中,37℃摇床培养1.5-2h.3.将菌种在冰上放置10min.4℃、4

氯化钙法（CalciumChloride）本方法适用于批量制备大肠杆菌感受态细胞,所得感受态细胞可以获得5x106到2x107转化克隆/微克超螺旋质粒DNA材料（MATERIALS）缓冲液和溶液（Bu

菌种保存采用甘油种结合超低温（-70℃）保存的方法,即用无菌甘油悬浮工程菌,并使甘油终浓度为30%（V/V）,所获物即为工程菌的甘油种.低温可使工程菌的生命活动处于非活跃状态而能较长时间保存细胞活力、

感受态细胞你先用稳定浓度的高纯质粒测一下效率,如果达不到10的5次方就别用了.如果效率挺高有6或7次方而转化子不多,那么就和你构建的质粒有关了.制备感受态,一个要快,二要一直保持细胞在冷冻状态,所有e

原核细胞正常状态不会主动吸收质粒载体,在感受态时细胞膜通透性增加,通过热击或电穿孔技术使载体进入细胞

第一,质粒转化感受态细胞时,只需要一定量的质粒完成转化即可,因此没必要使用高浓度的质粒.第二,质粒是环状的,浓度过高会使得发生断裂,聚集等.第三,浓度过高,溶液比较粘稠,不利于扩散.

1.感受态细胞没有制备好2.重组子整个就没有导入进细胞里再问：还有没有其他原因。。。。不够多~谢谢哈就算是重组子没有进入细胞内，那也应该还有白班，可是我的是什么颜色都没有再答：质粒上的抗生素抗性，没有

对照组被污染了,或者氨苄有问题,或者在配制培养基的时候在培养基还没冷却的时候就加了氨苄.其实大肠杆菌感受态可以买的,又不贵.自己做太麻烦了.我已经说了啊,可能是对照的大肠杆菌被污染了,或者这些大肠杆菌

电击法是利用高压脉冲,去处理细胞,在细胞膜表面形成一个20~40nm的瞬间空洞,这样外源基因就可以扩散进入细胞内；而氯化钙法是将处于对数生长期的细菌置于0℃的cacl2低渗溶液中,使细胞膨胀,同时ca